In vitro oocyte transport through the oviduct of buffalo and crossbred beef cows / Transporte de oócitos in vitro através do oviduto de búfalas e vacas de corte cruzadas

The present study was conducted to verify if the elevation of plasma concentrations of estradiol during superovulatory treatments affects the oocyte transport in buffalo females, as well as if the inferior quality of buffalo oocytes and/or some functional difference on the oviduct of these animals is responsible for the low embryo recovery rate in superovulated buffaloes when compared to cows subjected to the same treatment. Oviducts of 10 buffaloes and 15 of cows, treated to induce a single ovulation were used. The oviducts were placed on Petri dishes and received the following treatments: 5 buffalo oocytes with no E2 (G-BufBuf and G-BovBuf), 5 bovine oocytes with no E2 (G-BufBov and G-BovBov), 5 buffalo oocytes with E2 (G-BufE2Buf and G-BovE2Buf) and 5 bovine oocytes with E2 (G-BufE2Bov and G-BovE2Bov; factorial 2x2x2). Oocytes were incubated for 24h. Subsequently, oviducts were washed and oocytes were recovered and counted. Since no interactions were found between E2 treatment, oviducts and oocytes species, main effects were analyzed separately. Recovery rate and number of oocytes was higher on cattle compared to buffaloes (35.0+8.6% and 1.4+0.3 vs. 10.0±4.6% and 0.5±0.2, respectively; p<0.05); no effect of E2 treatment was observed on recovery rate and number of oocytes (29.8±9.0% and 1.3±0.4 vs. 16.9±6.1% and 0.7±0.2, respectively; p>0.05); the number of buffaloes and bovine oocytes recovered were similar (1.4±0.4 and 0.6±0.2, respectively; p>0.05). Oocytes recovery rate showed a trend (P=0.07) to be higher when buffalo oocytes were implanted when compared to bovine oocytes (35.2±9.2% vs. 12.9±5.4%). Present results suggest that oocyte transport by the oviduct of buffaloes and bovine was not dependent on oocytes species or E2 supplementation to the culture medium.

O presente estudo foi realizado para verificar se a elevação das concentrações plasmáticas de estradiol durante os tratamentos superovulatórios afeta o transporte dos oócitos em fêmeas bubalinas, bem como se a qualidade inferior dos oócitos de búfalos e/ou alguma diferença funcional no oviduto destes animais é responsável pela baixa taxa de recuperação de embriões em búfalas superovuladas quando comparadas a vacas submetidas ao mesmo tratamento. Foram utilizados 10 ovidutos de búfalas e 15 de vacas, tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram colocados em placas de Petri e receberam os seguintes tratamentos: sem E2 e inseridos com 5 oócitos de búfalas (G-BufBuf e G-BovBuf); sem E2 e com 5 oócitos de vacas (G-BufBov e G-BovBov); com E2 e com 5 oócitos de búfalas (G-BufE2Buf e G-BovE2Buf); e com E2 e com 5 oócitos de vacas (G-BufE2Bov e G-BovE2Bov; fatorial 2x2x2). Posteriormente, foram incubados por 24h e, após esse período, foram lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. Como não foi verificado efeito de interação, foram analisados os efeitos principais. O número e a taxa de recuperação de oócitos foi maior em ovidutos de vacas que de búfalas (1,4±0,3/35,0±8,6% vs. 0,5±0,2/10,0±4,6%; P<0,05). Foi verificado que o tratamento com ou sem E2 não interferiu no número e na taxa de recuperação de oócitos (1,3±0,4/29,8±9,0% vs. 0,7±0,2/16,9±6,1%; P>0,05). Não foi verificada diferença no número de oócitos de búfalas ou de vacas recuperados (1,4±0,4 e 0,6±0,2; P>0,05). Observou-se também que houve tendência (P=0,07) de maior taxa de recuperação de oócitos de búfalas que de vacas (35,2±9,2% vs. 12,9±5,4%). Os dados são indicativos de que o transporte de oócitos pelo oviduto de búfalas e de vacas independe da espécie do oócito e não é influenciado pelo E2.

Perfil de FSH e LH na divergência folicular em novilhas Nelore (Bos indicus) / FSH and LH profiles during follicle deviation in Nelore heifers (Bos indicus)

O presente estudo teve como objetivo traçar o perfil de gonadotrofinas em 12 novilhas Nelore, a fim de testar a hipótese de que há declínio nas concentrações de FSH e elevação transitória nos níveis de LH durante a seleção folicular. A partir da ovulação (D0) foram colhidas amostras de sangue da veia jugular a cada 12 horas até o D5, para a dosagem de FSH e LH plasmáticos. Empregou-se o método de radioimunoensaio de duplo anticorpo. A sensibilidade do ensaio de LH foi de 0,02ng/ml e a de FSH de 0,005ng/ml. Os coeficientes de variação intra-ensaio foram 13,6% e 18,8%, respectivamente. Os dados (média±EPM) foram normalizados para o momento da divergência folicular e, posteriormente, analisados por ANOVA e por regressão inear, cúbica e quadrática. Também foi empregado o Teste t para comparação entre o ponto mais alto e o mais baixo da curva. Não se verificou efeito de tempo sobre as concentrações plasmáticas de FSH e de LH quando se utilizou análise de variância e de regressão. Entretanto, através do Teste t pontual, o FSH atingiu as menores concentrações plasmáticas 36 (0,40±0,05ng/ml) e 60 horas (0,42±0,04ng/ml) após a divergência, comparativamente às 36 horas anteriores ao desvio, quando as concentrações foram máximas (0,63±0,08ng/ml). Conclui-se, portanto, que há declínio nas concentrações plasmáticas de FSH, contudo, não foi comprovada elevação transitória nas concentrações de LH próximo ao momento do desvio folicular em fêmeas Nelore.

Present study aimed to evaluate gonadotropins profiles in 12 Nelore heifers, in order to test the hypothesis that FSH concentrations decrease and LH presents a transient increase during follicle selection. Blood samples from jugular vein were harvested twice daily starting at the time of ovulation (D0) until D5. Plasma samples were assayed for FSH and LH by double antibody radioimmunoassay method. LH and FSH assay sensitivity was 0,02ng/ml and 0,005ng/ml, respectively. The intraassay coefficient of variation was 13,6% and 18,8%, respectively. Data (mean±SEM) were normalized to follicle deviation and analyzed by ANOVA and by linear, cubic, and quadratic regressions. Comparisons between higher and lower FSH values were also performed by T-test. There was no effect of time in plasmatic FSH and LH circulating levels when variance analysis or regression analysis were performed. However, by T-test, FSH concentrations reached the lowest plasmatic levels 36 (0,40±0,05ng/ml) and 60 hours (0,42±0,04ng/ml) after follicular deviation, comparatively to 36 hours before deviation, when the concentrations were maximal (0,63±0,08ng/ml). In conclusion, there is a FSH decrease, although a transient LH elevation has not been confirmed encompassing follicle deviation in Nelore females.

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua ou de vaca em estro com ou sem a adição de LH/FSH / In vitro production of bovine embryos with oestrus mare's serum or oestrus cow serum with or without LH/FSH

Mil duzentos e setenta e um oócitos foram divididos em 4 tratamentos com a finalidade de se avaliar a influência da adição de LH e FSH na produção in vitro de embriões bovinos com soro de vaca em estro (SVE) ou soro de éguas obtido no 1º dia do estro (SE). Independente do tratamento os oócitos foram maturados com TCM199 + 5,95mg/ml de Hepes, 0,025mg/ml de piruvato de sódio e 2,2mg/ml de bicarbonato de sódio, sendo adicionado 10 por cento de soro de égua (ES), 10 por cento de SVE (VS), 10 por cento de soro de égua + 0,5mg/ml de hormônio luteinizante bovino (LHb) + 0,01UI/ml de hormônio folículo estimulante recombinante humano-rFSHh (EH) e 10 por cento SVE + LHb + rFSHh (VH). Os oócitos assim tratados, foram maturados em estufa com 5 por cento de CO2 a 39ºC sob umidade saturada por 22-24h. Depois, foram fecundados em TALP-FERT por 18-20h e cultivados por 8 dias em meio SOF + 5 por cento de SE (ES e EH) ou SVE (VS e VH). As taxas de clivagem de 72 por cento obtidas no grupo VH (229/316) e 61 por cento no grupo VS (193/315) foram significativamente menores (p<0,05) que as dos grupos ES (80 por cento - 254/317) e EH (80 por cento - 257/323). A produção de embriões (blastocistos iniciais, blastocistos, blastocistos expandidos e eclodidos) no D7 após a inseminação para os grupos ES (32 por cento), EH (28 por cento) e VH (27 por cento), foi significativamente superior aos 20 por cento obtidos no VS (p<0,05). No D9, verificou-se uma diferença significativa (p<0,05) entre os grupos ES (31 por cento) e EH (29 por cento) quando comparados com o grupo VS (22 por cento), mas não houve diferença quando comparamos com o VH (24 por cento). A taxa de eclosão em D9 foi de 11 por cento (ES), 11 por cento (EH), 10 por cento (VS) e 5 por cento (VH). Não houve diferença entre as médias do número de células dos embriões (Blastocistos expandidos e eclodidos) obtidos no D9. Conclui-se, com estes resultados que, para a obtenção de taxas regulares de blastocistos, não seja necessária a adição de hormônios quando se utilize o soro de égua, e que os hormônios devam ser adicionados quando se utilize soro de vaca.

Produção in vitro de embriões bovinos em tubos sem controle da atmosfera gasosa / In vitro production of bovine embryo in tubes without gaseous atmosphere control

Com a maior utilização da OPU existe a necessidade de encontrar alternativas para iniciar as primeiras fases da PIV sem controle da atmosfera. O desenvolvimento de um método prático e simples de transporte/maturação/fecundação permitiria maior eficiência do laboratório e diminuição dos custos de produção. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método de maturação e fecundação para complexos cumulus oócitos (CCO) em tubos de polipropileno sem gaseificação, mantidos em banho-maria. A maturação in vitro em estufa foi conduzida em TCM-199 modificado (controle) enquanto que para os tratamentos em banho-maria, em tubos, o meio foi acrescido de 25mM de N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-ácido etanosulfônico (HEPES). Na fecundação in vitro dos oócitos em tubos, os CCO foram mantidos em banho-maria a 39ºC em Talp-Fert, acrescido de HEPES em concentrações entre 10mM a 28,7 mM por 10 a 18 horas, sob óleo mineral. O cultivo realizou-se em placas em bolsas gaseificadas com meio SOFaaci com soro de vaca em estro (SVE), sob óleo mineral, em estufa com 5,00 por centoCO2 , 5,00 por centoO2 e 90,00 por cento de N2 a 39ºC, por 9 dias. Verificou-se que CCO maturados por 24h em tubos não gaseificados, mantidos em banho-maria também podem ser fecundados em meio Talp-Fert com 25 mM de HEPES, em tubos não gaseificados, mantidos em banho-maria durante 10 horas. As taxas de clivagem, blastocistos em D7 e D9 em tubos não gaseificados foram semelhantes (P>0,05) aos procedimentos em estufa. A fecundação em Talp-Fert com 10 mM a 28,7 mM de HEPES em tubos mantidos em banho-maria prejudica o desenvolvimento embrionário quando conduzida por 18 horas.